产品货号

JYY-0746

背景描述

该细胞来源于54岁白人男性。源于正常成人前列腺周边组织的上皮细胞经过转染HPV-18后建系得到该细胞株。在三维基质胶培养时，在雄激素作用下，RWPE-1细胞形成腺胞并向培养基中分泌PSA（kallikrein 3, KLK3）。来源于RWPE-1的细胞再用Kirstin鼠类肿瘤病毒转染Ki-ras基因，建立了能成瘤的RWPE-2细胞株和 RWPE2-W99细胞株。同时，用N-甲醇-N-硝基脲处理RWPE-1，建立了一系列模拟前列腺癌进程中不同时期的成瘤细胞株， 分别是 WPE1-NA22, WPE1-NB14, WPE1-NB11 和 WPE1-NB26 细胞株。 据提供者报道，RWPE-1 细胞株经过检测，乙肝、丙肝、人免疫缺陷病毒都呈阴性。

培养条件

准备角质细胞无血清培养基 (包含两个组份：基础培养基1瓶+生长因子1管5mL）或者 准备Defined K-SFM (part of kit NO:,10744-019)， 1% P/S来培养细胞。

气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

细胞特征

1）来源：前列腺正常细胞

2）形态：上皮细胞样，贴壁生长

冻存条件

无血清冻存液。

细胞检测

不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

供应限制

仅供科研使用

注意事项

1、Defined K-SFM (part of kit NO:,10744-019)培养液包含两个组份：基础培养基1瓶500mL（货号10785-012）+生长因子1管1mL  ( 货号10784-015).添加因子后不要过滤完全培养基.在无血清培养体系中，细胞生长缓慢并且需要一些时间才能贴壁，可以根据实验要求酌情添加1-2%FBS来进行培养。

2、由于角质细胞无血清培养基或者Defined K-SFM为无血清培养液无法终止胰酶消化，加入3-4mL用RPMI-1640或者DMEM等基础培养基配置的含10%FBS的培养基来终止消化，1000rpm/5min,去除胰酶后再加入细胞完全培养液进行传代培养。

3、该细胞贴壁较慢，为使细胞贴壁更容易，建议可提前在培养皿/培养瓶中铺 0.25%的明胶溶液(我们推荐使用细胞包被工作液或者使用康宁3289细胞培养瓶来进行培养该细胞）

注意事项

细胞接收后的处理：

1）收到细胞后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。

2）请在4或5X显微镜下确认细胞状态，同时给刚收到的细胞拍照（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为售后时收到时细胞状态的依据。

3）贴壁细胞：细胞在37℃培养箱中放置2-3h，显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况，有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下，可去除培养瓶中灌液培养基（若有未贴壁的细胞需要离心回收，重悬打入到原培养瓶中）,加入新配制的完全培养基6-8mL，放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上，可以对细胞进行传代处理。传代过程中，若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。

1） 冻存细胞的复苏：

将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。

2） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于贴壁细胞传代可以参考以下方法：

1.吸去培养液，加PBS清洗1-2遍，去PBS。加入0.25%胰酶2ml消化15秒，去胰酶。将培养瓶放37度培养箱，靠残余胰酶继续消化细胞3-10分钟直至细胞变圆（每3分钟观察一次。）

2.加12ml完全培养基，吹打均匀，即可分到2个T25培养瓶里。（细胞1传2，若顾客使用培养皿或培养孔板，建议先包被）

3） 细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。下面T25瓶为例；

1. 细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中，可使用血球计数板计数，来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×10⁶~1×10⁷个活细胞/ml.

2. 1000rpm离心3-5min，去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ，按每1ml冻存液含1×10⁶~1×10⁷个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。

3. 将要冻存的细胞置于程序降温盒中，-80度冰箱中过夜，之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。

备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。  收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1：2传代 。