产品货号

JYYP-0001

背景描述

胚胎干细胞（ESC）是来源于囊胚内细胞团的全能干细胞。具有向外胚层、内胚层、中胚层分化的能力，可以分化成各种类型细胞。不同于其他干细胞，胚胎干细胞具有无限增殖能力。胚胎干细胞的可塑性和无限增殖的能力，使其成为再生医学和组织工程研究的热点。

129 小鼠胚胎干细胞在体外扩增培养后仍维持正常二倍体，表达胚胎干细胞的特殊标记物，在体外培养能形成拟胚体（EB），体内实验可以形成畸胎瘤。129 小鼠胚胎干细胞是很多领域的基础和应用研究的强有力工具，包括发育和调控研究、再生生物学、潜在治疗方法。此外对胚胎干细胞进行基因修饰并将其引入到小鼠生殖系中是获得基因修饰小鼠的一个非常有效的方法。

129 小鼠胚胎干细胞来源于 129 小鼠 3.5 天囊胚期的内细胞团，使用的小鼠胚胎干细胞培养基并在经γ-射线处理的 MEF（小鼠胚胎成纤维细胞）上培养。

培养条件

准备129 小鼠胚胎干细胞专用培养基。

气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

质量控制

1.通过细菌、真菌、支原体、内毒素检测。

2. 通过细胞复苏活力检测，复苏存活率>50%。

3. 通过细胞周期检测，倍增周期<72 h。

4.通过免疫荧光检测，表达 Oct4、SSEA-1 和 Nanog (≥ 90%)，不表达 SSEA-3 和 SSEA-4 (≤ 5%)。

细胞检测

不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

供应限制

仅供科研使用

运输方式

常温或冻存（T25瓶或者1mL冻存管包装）

备注

使用该细胞专用完培待细胞长满冻存一半细胞，之后养两代。每一代冻一瓶细胞。(动物原代细胞不建议冻存)传代比例，首次康宁 T25 瓶 1:2 传代，严禁用皿培养细胞。传代方法:建议前2代建议使用我们的温和消化法。

1.细胞密度到达 90%，可以进行传代。

2.吸去培养液，加 PBS 清洗 1-2 遍，去 PBS。加入 0.25%胰酶 2m1消化 15 秒，去胰酶。将培养瓶放37度培养箱，靠残余胰酶继续消化细胞 3-10 分钟直至细胞变圆还要大部分(80%)细胞脱落(每3分钟观察一次，轻拍一下瓶侧。)

3.加 12m1 完全培养基，吹打均匀，即可分到2个T25 培养瓶里。(细胞1传2，若顾客使用培养皿或培养孔板，建议先包被)

4.瓶中的运输液仅运输作用，严禁用于培养细胞。

5.每天换液。培养液没变黄，可以半量换液。培养液变黄，则需要全部换液。

注意事项

1. 严格的无菌环境。务必保证实验室整体、超净台和培养箱的清洁。

2. 规范的操作方式。请按照产品说明书描述的方式操作，严格控制变量，做好对照实验。

3. 需要合适的、质量可靠的实验耗材和试剂。本产品需使用适合贴壁细胞生长的培养容器，且不建议重复使用。使用的试剂必须经验证可靠，适宜细胞生长且批间差异小。

4. 如果使用饲养层细胞进行培养，建议使用小鼠胚胎成纤维细胞（已灭活）。

5. 如果使用无血清无饲养层的培养条件，建议使用小鼠胚胎干细胞无血清培养基。

6. 通常 129 小鼠胚胎干细胞接种密度为(1~2) ×10⁴个活细胞/cm2。该细胞的生长与供体自身特性和后续培养体系的关系极大。我们建议根据各批次、各代次实际生长情况按比例传代培养。

注意：本产品冻存液中含有 DMSO，其具有潜在风险，请谨慎处理。

培养瓶（皿）包被 0.1%明胶

所需材料

0.1%明胶溶液

操作步骤

注意：为了使γ射线照射处理的第一代小鼠胚胎成纤维细胞更有效地贴附于培养器皿，要对培养器皿的表面进行明胶包被。

1. 加适量 0.1%明胶到培养瓶/皿中，能覆盖整个培养瓶/皿底面即可。

2. 摇匀液体使其覆盖整个培养瓶/皿的底面。

3. 将铺有明胶的培养瓶/皿放置在超净台至少 30 min。

4. 30 min 后，弃去明胶，待培养瓶/皿晾干后，即可用于接种细胞。

注意：包被明胶的培养瓶/皿在无菌和明胶不蒸干的条件下，可以在 4°C 保存两周。