人骨骼肌成纤维细胞分离自四肢肌肉组织。骨骼肌又称横纹肌，肌肉中的一种，约占全身重量的40%。肌肉可分为肌腹和肌腱，其中两端较细呈乳白色的部分为肌腱，呈索条或扁带状，由平行的胶原纤维束构成，色白，有光泽，但无收缩能力，腱附着于骨处与骨膜牢固地编织在一起，属于结缔组织，同时，肌腹的表面包以结缔组织性外膜，向两端则与肌腱组织融合在一起，这些结缔组织是由成纤维细胞构成，具有支持、连接、保护和营养功能。

人骨骼肌成纤维细胞采用胰蛋白酶 - 胶原酶混合酶消化后差速贴壁制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。