人中耳上皮细胞主要分离自中耳腔（鼓室）及咽鼓管的内衬组织。中耳上皮细胞构成了覆盖中耳腔和咽鼓管表面的上皮层，主要类型为假复层纤毛柱状上皮，其中包含纤毛细胞、无纤毛细胞（如基底细胞、中间细胞）、杯状细胞等。这些细胞在维持中耳正常生理功能、防御病原体入侵以及保护中耳结构方面扮演着至关重要的角色。中耳上皮细胞，特别是其中的杯状细胞和无纤毛分泌细胞，能够产生和分泌黏液。中耳上皮细胞表达多种离子通道和转运蛋白（如钠通道ENaC、氯通道CFTR、钠钾泵Na⁺/K⁺-ATPase等）。中耳上皮细胞不仅是物理屏障，也是活跃的免疫哨兵。

人中耳上皮细胞采用链霉蛋白酶-中性蛋白酶混合消化法结合差速贴壁法，并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10⁵ cells/瓶。