产品货号

JYY-0013

背景描述

人胚肾细胞293细胞插入SV40 T-抗原基因后产生的高转染效率的衍生株称为293T。该细胞 初的名字是293tsA1609neo，携带SV40复制序列，被广泛用于逆转录病毒生产、基因表达和蛋白表达。

培养条件

准备DMEM+10%胎牛血清+L-谷氨酰胺（2mM)1%+NEAA 1%+ 双抗 1%。

气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

细胞特征

1） 来源：人胚胎肾脏

2） 形态：上皮细胞样，贴壁生长，贴壁能力较弱

冻存条件

无血清冻存液。

安全等级

BSL-1

供应限制

仅供科研使用

运输方式

常温或冻存（T25瓶或者1mL冻存管包装）

注意事项

该细胞贴壁松散，操作时请尽量轻柔，换液是需预热培养基，收货如有大块脱落的细胞团，为正常现象，处理方法：收集培养液，离心1000r3min收集细胞。细胞重铺回原瓶。

注意：1.该细胞贴壁能力较弱，培养时可酌情使用预铺0.2%明胶的培养瓶/培养皿。完全培养液中需添加热灭活胎牛血清。细胞生长不能过密，过密细胞容易脱落，脱落下来的细胞可以通过离心收集，使用0.25% Trypsin-0.53 mM EDTA 消化后继续培养。

2.如果发生293T细胞不贴壁，漂浮在培养基中的现象，请确认所使用的DMEM中碳酸氢钠浓度及培养箱中CO2浓度。并参考以下培养体系：

a) DMEM由1.5 g/L碳酸氢钠配制而成，使用5％CO2培养箱。

b) DMEM由3.7 g/L碳酸氢钠配制而成，使用10％CO2培养箱。

当使用碳酸氢钠含量高的培养基时，必须将这些细胞在10％CO2中孵育，以便正确缓冲培养基。当培养基没有适当缓冲时，239T细胞虽然可以存活，但将无法粘附并保持漂浮在培养基中。

1）冻存细胞的复苏：

将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。

1） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于贴壁细胞传代可以参考以下方法：

1.细胞密度到达90%，可以进行传代。

2.吸去培养液，加PBS清洗1-2遍，去PBS。加入0.25%胰酶2ml消化15秒，去胰酶。将培养瓶放37度培养箱，靠残余胰酶继续消化细胞3-10分钟直至细胞变圆（每3分钟观察一次。）

3.加12ml完全培养基，吹打均匀，即可分到2个T25培养瓶里。（细胞1传2，若顾客使用培养皿或培养孔板，建议先包被）

3）细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。下面T25瓶为例；

1. 细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中，可使用血球计数板计数，来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×10⁶~1×10⁷个活细胞/ml.

2. 1000rpm离心3-5min，去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ，按每1ml冻存液含1×10⁶~1×10⁷个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。

3. 将要冻存的细胞置于程序降温盒中，-80度冰箱中过夜，之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。

备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。  收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1：2传代 。